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骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kun-ze)J.Sm.的干燥根茎。其呈扁平长条状,多弯曲,有分枝,长5〜15cm,宽1〜1.5cm,厚0.2〜0.5cm。表面密被深棕色至暗棕色的小鳞片,柔软如毛,经火燎者呈棕褐色或暗褐色,两侧及上表面均具突起或凹下的圆形叶痕,少数有叶柄残基和须根残留。体轻,质脆,易折断,断面红棕色,维管束呈黄色点状,排列成环。气微,味淡、微涩。具有补肾强骨,续伤止痛之功能。用于肾虚腰痛,耳鸣耳聋,牙齿松动,跌扑闪挫,筋骨折伤;外治斑秃,白癜风。骨碎补主含柚皮苷(naringin)、新北美圣草苷等多种黄酮类成分,其内在质量评价多以柚皮苷为指标179,其含量测定方法多用HPLC法,但供试品溶液的制备方法有回流提取法和索氏提取法之分,提取时间短者3h179,长者10~12h,流动相也不尽相同。因此,有必要对供试品溶液制备中不同提取方法、不同提取时间及流动相进行比较研究,以找到最佳的含量测定方法,以使其含量测定结果更准确、更可靠,设计烫骨碎补中柚皮苷含量测定方案如下;
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鉴别:(1)本品横切面:表皮细胞1列,外壁稍厚。鱗片基部着生于表皮凹陷处,由3〜4列细胞组成;内含类棕红色色素。维管束周韧型,17〜28个排列成环;各维管束外周有内皮层,可见凯氏点;木质部管胞类多角形。粉末棕褐色。鱗片碎片棕黄色或棕红色,体部细胞呈长条形或不规则形,直径13〜86pm,壁稍弯曲或平直,边缘常有毛状物,两细胞并生,先端分离;柄部细胞形状不规则。基本组织细胞微木化,孔沟明显,直径37〜101μm。(2)取本品粉末0.5g,加甲醇30ml,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品,加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验,吸取上述三种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
检查:水分不得过15.0%(中国药典2015年版四部通则0832第二法)。总灰分不得过8.0%(中国药典2015年版四部通则2302)。
浸出物:照醇溶性浸出物测定法(中国药典2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定,用稀乙醇作溶剂,不得少于16.0%。
含量测定:照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-醋酸-水(35:4:65)为流动相;检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含柚皮苷60μg的溶液,即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约0.25g,精密称定,置锥形瓶中,加甲醇30ml,加热回流3小时,放冷,滤过,滤液置50ml量瓶中,用少量甲醇分次洗涤容器,洗液滤入同一量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品按干燥品计算,含柚皮苷(C27H32O14)不得少于0.50%。